LATERALT FLÖDESTEST
Introduktion
Ett lateralt flödestest (LFT) är en enkel och snabb diagnostisk enhet som används för att detektera patogen eller protein i ett vätskeprov. Genom att använda laterala flödestest för att påvisa bakterier i vatten erbjuder vi en simpel provtagningsmetod som kan utföras av otränade individer med resultat direkt på plats inom 30 minuter. Tillskillnad från andra metoder inom vattentestning eliminerar vi därmed behovet av transport, labbutrustning, teknisk personal och tidskrävande processer. Detta gör laterala flödestest till ett utmärkt verktyg för vattenanalys som kan användas av alla.
Laterala flödestet fungerar enligt principen immunokromatografi, där vätska transporteras längs en testremsa och interagerar med reaktiva molekyler för att ge ett visuellt positivt eller negativt resultat. Dessa reaktiva molekyler är vanligtvis antikroppar kopplade till signalpartiklar som kan binda in till målbakterier i provet som då tillsammans transporteras vidare på testremsan för att sedan fångas upp på testlinjen. Ackumulering av signalpartiklar på testlinjen ger då upphov till ett synligt färgband på testet, vilket indikerar på positivt resultat.
Baskomponenter i ett Lateralt Flödestest
De grundläggande komponenterna i ett lateralt flödestest utgörs av en provdyna, konjugatdyna, nitrocellulosamembran och absorberande dyna som alla överlappar minst 1-2 mm för att möjliggöra obehindrat kapillärflöde av provet. Dessa komponenter hålls samman av ett stödkort som stabiliserar strukturen av testremsan.
Provdyna
Här appliceras provet. Provdynan kan innehålla buffertlösningar eller andra reagenser som hjälper till att förbereda provet för analys genom att filtrera bort stora partiklar och stabilisera målanalyten. Provdynan främjar också en jämn och kontrollerad distribution av provet till intilliggande konjugatdyna.
Konjugatdyna
Provet flödar lateralt från provdynan in i konjugatdynan som innehåller torkade antikroppar kopplade till signalpartiklar, specifika för målbakterien. Dessa signalpartiklar är vanligtvis kolloidalt guld, latexkulor eller fluorescerande färgämnen. När provet når konjugatdynan frisläpps och blandas de signalmärkta antikropparna med provet. Vid närvaro av målbakterie binder de signalmärkta antikropparna in för att bilda ett analyt-märkt-antikroppskomplex som migrerar vidare tillsammans på testremsan.
Nitrocellulosamembran
Detta membran är kärnan i testet där detektionen sker. Nitrocellulosamembranet innehåller två viktiga regioner:
Testlinje:
Innehåller immobiliserade antikroppar som fångar upp analyt-märkta antikroppskomplex genom att binda in via målbakterien. Detta genererar en ackumulering av signalpartiklar på testlinjen vilket ger upphov till att en synlig linje för visuell detektion av målanalyten. Avsaknad av målanalyt i provet resulterar i att testlinjen förblir blank.
Kontrollinje:
Precis som testlinjen så innehåller kontrollinjen immobiliserade antikroppar. Dessa antikroppar fångar däremot upp antikroppar oavsett om målbakterien är närvarande eller inte. Kontrollinjens funktion är att säkerställa att testet fungerar korrekt. En synlig kontrollinje verifierar därmed att testet utförts korrekt och att resultaten är tillförlitliga.
Absorberande dyna
Belägen i slutet av testremsan, absorberar denna dyna överflödig provvätska och driver provflödet över membranet genom kapillärkraft. Den absorberande dynan säkerställer också ett stabilt kontinuerligt flöde av provet längs testremsan.
Stödkort
Ger strukturellt stöd för hela testremsan och håller komponenterna på plats. Stödkortet skyddar också testet från mekanisk skada vid hantering.
Mekanism
1. Provförberedelse
En manuell process där vätskeprovet förbereds innan applikation på det laterala flödestestet. Beroende på provtyp kan denna process se olika ut. För vattenprov är det vanligt att koncentrera målbakterien med en simpel filtreringsprocess samtidigt som provvolymen anpassas efter testet.
2. Provapplikation
Användaren applicerar vätskeprovet på provdynan efter att ha utfört provförberedelsen. Provet börjar migrera lateralt på testremsan.
3. Migration och Bindning
När provet migrerat till konjugatdynan kommer de torkade signalmärkta antikropparna återfuktas och lösas upp. Ifall målbakterien finns i provet binder antikropparna in och reagerar för att bilda analyt-märkta antikroppskomplex.
4. Uppsamling och visualisering
På testlinjen finns antikroppar som är immobiliserade på nitrocellulosamembranet med affinitet för analyt-märkta antikroppskomplex. Ifall målbakterien är närvarande kommer analyt-märkta antikroppskomplex fångas upp på testlinjen och ackumuleringen av signalmolekyler kommer ge upphov till en färgsignal. Intensiteten av färgsignalen är direkt proportionell mot mängden målbakterie i provet vilket kan användas för kvantitativa resultat. Samtidigt kommer migrerande antikroppar, oavsett om de bundit in till målbakterien eller inte fångas upp och ackumuleras på kontrollinjen för att säkerställa att testresultaten är korrekta.
5. Avslut
Provet kommer fortsätta migrera tills det når den absorberande dynan som suger åt sig överbliven vätska samtidigt som den hämmar bakåtflöde vilket kan påverka resultatet.
